第三次筛选
第三次筛选的目的是获得产生特异性抗体的杂交瘤细胞。在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HAT培养液筛选出的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原决定簇的特异性杂交瘤细胞，才能制备单一性抗体。筛选的方法很多：
（1）抗原与抗体发生的免疫学反应，通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释后接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个杂交瘤细胞，再由这些单细胞克隆生长，当细胞形成集落时，进行专一性抗体阳性检测。
（2）免疫荧光技术，是一种将免疫反应的特异性与荧光分子的可见性结合起来的方法。在一定条件下，用化学方法将荧光物质（荧光素）与抗体结合，但不影响抗体与抗原的结合活性，与相应抗原结合后，在荧光显微镜下观察。
（3）放射免疫测定，是一种以放射性同位素作为标记物，将同位素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合起来的测定技术。应用竞争性结合的原理，用放射性同位素标记抗原（或抗体）与相应抗体（或抗原）结合，通过测定抗原抗体结合物的放射活性来判断，可进行超微量分析，敏感性高，用于测定抗原、抗体、抗原抗体复合物。
（4）酶联免疫吸附测定，是一种以抗原—抗体反应的特异性与酶对底物高效催化作用结合起来，根据酶作用底物后会显色，以颜色变化判断试验结果的测定技术。将可溶性抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，再进行免疫酶反应，用分光光度计比色以定性或定量，这是目前应用最广泛的生物学技术之一。
