电泳缓冲液和凝胶载样缓冲液的作用
问题1：电泳缓冲液的作用
电泳时阳极与阴极都会发生电解反应，引起阳极和阴极的pH发生改变。如何使电泳系统的pH 保持相对稳定呢？
教材提到将电泳缓冲液加入电泳槽中，电泳缓冲液没过凝胶1mm为宜。
那么，电泳缓冲液的成分是什么？电泳缓冲液维持电泳系统 pH稳定的原理是什么？电泳缓冲液还有其他的作用吗？
电泳时阳极与阴极都会发生电解反应，阳极发生氧化反应，阴极发生还原反应，长时间的电泳会使阳极变酸、阴极变碱，加入电泳缓冲液可以维持电泳系统 pH的相对稳定。
电泳缓冲液是指在进行凝胶电泳时所使用的缓冲溶液，是凝胶电泳系统的一个重要组成。
常用的核酸电泳缓冲液有Tris-乙酸（TAE）和Tris-硼酸（TBE），这两种缓冲液都含有Tris 碱和EDTA（乙二胺四乙酸），主要区别在于酸的成分不同。
两种缓冲液在电泳中的作用相同，但各有优缺点：TAE分辨率高，但缓冲能力弱，不能长时间使用，需要经常更换；TBE分辨率略低，但缓冲能力强，可以反复使用。
电泳缓冲液可以使溶液具有一定的导电性，有助于DNA分子的迁移。
Mg²*是DNA酶的激活剂，电泳缓冲液中的EDTA是一种螯合剂，能与Mg2*等二价金属离子结合，可防止电泳时DNA被降解。
DNA分子没有颜色，如何观测电泳进程呢？加样时，样本是否会飘散在电泳缓冲液中？
教材提到：将扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液（内含指示剂）混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。
那么，凝胶载样缓冲液是怎样起指示作用的？它又是如何解决样品飘散问题的呢？
凝胶载样缓冲液是在加样之前与待电泳的样本相混合的一种缓冲液。
琼脂糖凝胶电泳用到的载样缓冲液（DNA loading buffer）主要由溴酚蓝、二甲苯青FF、Tris-HCl、甘油或蔗糖等组成。
溴酚蓝和二甲苯青FF是两种在电场中以预知速率向正极泳动的染料。
琼脂糖凝胶浓度在0.5%～1.4%的范围内，以0.5×TBE 作电泳液时，溴酚蓝呈现蓝紫色，与长300bp的双链线状DNA的迁移速度相同，而二甲苯青FF呈现蓝色，与长4kb的双链线状DNA的迁移速度相同。
这两种指示剂能够分别显示300bp DNA和4kb DNA的电泳进程，指示终止电泳的时间。
在电泳时，当溴酚蓝染料移动到距凝胶前沿1～2cm处，要停止电泳。
染料的另一个作用是使样本呈现颜色，完成加样的加样孔呈现蓝色，未加样的加样孔为无色，从而使加样操作更加便利。
若样品密度较小，容易流入附近加样孔，会造成交叉污染，影响结果的分析。
缓冲液中含有的甘油或蔗糖成分能够增加样品密度，保证每个样品更容易沉入各自的加样孔，防止飘散进入其他加样孔。
|