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 1.2发酵工程的无菌技术——2022-2023学年高二生物学苏教版
【基础练习】
1.关于牛肉膏蛋白胨培养基的配制需要在火焰旁操作的是( )
A.称量 B.灭菌 C.溶化 D.倒平板
2.利用固体培养基培养大肠杆菌时要防止培养基被污染。某小组采用平板划线法进行实验，培养一段时间后，发现培养基已经被霉菌污染。下列对产生污染的原因分析，错误的是( )
A.接种前，未对操作者进行严格的消毒
B.接种时，未在酒精灯火焰附近进行操作
C.培养中，未将平板培养基倒置培养
D.接种后，大肠杆菌发生基因突变
3.获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的污染。下列有关消毒和灭菌技术的叙述，正确的是( )
A.牛奶等食品常用巴氏消毒
B.紫外线、氯气的消毒属于化学药剂消毒法
C.接种针、接种环等金属用具不能使用高压蒸汽灭菌法灭菌
D.培养基、玻璃试管常用干热灭菌法灭菌
4.高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是( )
A.将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中
B.将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上
C.将分解尿素的细菌接种到无菌培养基上，进行分离和计数
D.将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上
5.下列操作不能达到灭菌目的的是( )
A.使用高压蒸汽灭菌锅处理培养基 B.在火焰上灼烧接种环
C.使用干热灭菌箱处理金属用具 D.防疫期间用石炭酸喷洒教室
6.消毒和灭菌是微生物培养中常用的操作方法。下列说法正确的是( )
A.微生物接种技术的方法都相同，其核心就是要防止杂菌污染，保证培养物的纯度
B.在100℃下煮沸5～6min属于消毒方法，可杀死绝大多数微生物细胞
C.在灭菌后倒平板前，加入一定量的缓冲液以调节培养基的pH
D.高压蒸汽灭菌，只有当压力表的压力降到一个标准大气压时，才能打开盖子
【能力提升】
7.消毒和灭菌是两个不同的概念，下列哪些事物适用于消毒处理( )
①皮肤
②饮用水
③牛奶
④注射器
⑤培养皿
⑥接种环
⑦培养基
⑧手术刀
A.①②③ B.④⑤⑥⑦ C.①②④⑤⑥⑧ D.①②③⑧
8.下列关于微生物培养的叙述，正确的是( )
A.培养过微生物的培养基经灭菌后仍可用于培养微生物
B.涂布接种时，要待涂布器上酒精燃尽后冷却再使用
C.平板划线时，第一区和最后一区的划线要连接起来，以便比较前后的菌落数
D.长期保存菌种时，可以采用甘油管藏法，放在4℃冰箱中保存
9.平板划线法和稀释涂布平板法是常用的两种接种方法。下列相关叙述错误的是( )
A.两种方法都能获得由单个细胞繁殖而成的单菌落
B.如果菌液本来浓度不高，则可以适当降低稀释倍数
C.接种环在第一次划线前和最后一次划线后都需要灼烧灭菌，其余过程不需要
D.平板划线法要求在培养基表面连续划线，且除第一次划线外，每一次划线都是从上一次划线的末端开始
10.下列关于倒平板及对菌种纯化的说法，正确的是( )
A.倒平板时左手将灭过菌的培养皿盖完全打开
B.使用已灭菌的接种环及培养基之后不需要再灭菌
C.平板冷凝后要将平板倒置，以防皿盖上的冷凝水落入培养基
D.涂布器用火焰灼烧后立即浸入酒精中
11.下列关于微生物的纯培养实验的叙述，错误的是( )
A.微生物的培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染
B.为防止蛋白质变性，不能用高压蒸汽灭菌法对牛肉膏蛋白陈培养基进行灭菌
C.平板划线时，接种环应在固体培养基表面轻轻地连续划线
D.完成平板划线后，应将平板立刻倒置培养以免污染培养基
12.柴油是重要的燃料油之一，泄露或不当排放会造成环境污染。研究者从被柴油污染的土壤中获取了柴油降解菌。下列叙述正确的是( )
A.为获得柴油降解菌，需选用以柴油为唯一碳源的培养基
B.实验过程中所用的培养基和土壤样液均需进行严格灭菌
C.用稀释涂布平板法分离、计数菌落时，涂布器蘸取菌液前需要灼烧灭菌
D.可以逐步提高培养基中的柴油浓度来筛选对高浓度柴油耐受性更强的柴油降解菌
13.1881年，科赫在第七届全球医学大会展示了用固体培养基进行平板涂布分离微生物的技术，该技术深刻地影响和促进了整个微生物学的发展。平板涂布部分操作如图所示，下列相关叙述错误的是( )
A.稀释涂布平板法可用于分离纯化大肠杆菌
B.平板涂布时，涂布器在灼烧后应立即进行涂板，以免杂菌污染
C.图中的平板涂布操作中的唯一不规范之处是培养皿的盖完全打开
D.稀释涂布平板法计数得到的结果往往会比实际活菌数目要高
14.E-Tst法是一种用于确定抗菌药物最小抑菌浓度（MIC）的定量检测方法。其原理为将载有抗生素连续梯度浓度的塑料条（E-Tst条）置于已接种待测菌液的琼脂平板上，从抑菌圈与E-Test条交界处可读出MIC值。图是六种抗生素（①~⑥）对某细菌抑菌情况的测定结果，每个E-Test条上抗生素浓度范围均为0.016~256μg/mL。下列相关叙述正确的是( )
A.检测时，将待测菌液采用稀释涂布平板法接种于琼脂平板培养基上
B.该菌株对不同抗生素的敏感性大小为②>③>⑥>⑤>④>①
C.部分抑菌圈内出现零散细小的菌落，可能是菌株出现了抗药性突变
D.该菌株对抗生素④的MIC值应取1.0g/μmL和256μ/mL的中间数值
15.奶牛的瘤胃中有大量的尿素分解菌。现有科学小组利用屠宰场提取的奶牛瘤胃内容物，对其进行分离计数，过程如下图。请据图分析并回答下列相关问题：
(1)将5g内容物加入 mL无菌水制成滤液，并继续进行系列浓度梯度稀释。取不同浓度稀释液各0.1mL，用涂布平板法接种到培养基上，需在无氧条件下培养，原因是 。若在稀释倍数为105的三个培养基中，菌落数分别是151、164、180，则每克内容物中尿素分解菌的数目为 个。
(2)配制培养基时，除以 作为唯一氮源外，还需加入的营养成分有碳源、水和无机盐，不能利用尿素的微生物不能生长，该培养基属于 ，制成培养基一般需要经过 灭菌，倒平板时培养基温度一般冷却至 。
(3)在饲料中添加尿素后，奶牛小肠总蛋白质增加60%～85%，其原因是 。
答案以及解析
1.答案：D
解析：AC、称量和溶化是在灭菌前，不需要在火焰旁操作，A、C错误；
B、培养基灭菌是用高压蒸汽灭菌法，B错误；
D、倒平板需要在酒精灯火焰旁操作，D正确。
故选D。
2.答案：D
解析：A、接种前，未对操作者进行严格的消毒，则操作者的双手可能在接种时将霉菌带入培养基，A不符合题意；
B、接种时，未在酒精灯火焰附近进行操作，则环境中的霉菌可能进入培养基，B不符合题意；
C、培养中，未将平板培养基倒置培养，则培养皿上形成的水珠可能会污染培养基，使杂菌生长，C不符合题意；
D、大肠杆菌突变会使相应性状发生改变，但不会形成霉菌，D符合题意。
故选D。
3.答案：A
解析：A、牛奶是利用高温消毒来杀菌以延长牛奶的保质期，因此属于巴氏消毒法，A正确；
B、紫外线消毒属于物理消毒，B错误；
C、接种环、接种针等金属用具常使用灼烧法进行灭菌，也可使用高压蒸汽灭菌法灭菌，C错误；
D、培养基需要使用高压蒸汽灭菌法灭菌，D错误。
故选A。
4.答案：C
解析：A、不进行严格的灭菌对葡萄酒制作的影响不大，因为多数微生物不能在缺氧、酸性和含糖较高的环境中生存，A错误；
B、不进行严格的灭菌对腐乳制作的影响不大，因为腐乳制作时还需在其中放入酒精、盐和香辛料等，这些都具有杀菌作用，B错误；
C、植物组织培养要求严格的无菌环境，如果灭菌不彻底，会造成培养的幼苗生长缓慢甚至培育失败，C正确；
D、选择培养基是根据要培养的微生物的代谢特点制备的，一般的杂菌在其上面也很难生存，D错误。
故选C。
5.答案：D
解析：A、使用高压锅处理器皿，即高压蒸汽灭菌，能达到灭菌的目的，A不符合题意；
B、在火焰上灼烧接种环，即灼烧灭菌，能达到灭菌的目的，B不符合题意；
C、使用干热灭菌箱处理金属用具属于干热灭菌，可以达到灭菌的目的，C不符合题意；
D、防疫期间用石炭酸喷洒教室，属于消毒，不能达到灭菌的目的，D符合题意。
故选D。
6.答案：B
解析：A、微生物接种技术的方法各不相同，但核心都是要防止杂菌污染，保证获得纯净的培养物，A错误；
B、在100℃煮沸5～6分钟属于煮沸消毒法，可杀死大部分微生物，B正确；
C、为防止污染，应在灭菌前，加入一定量的缓冲液以调节培养基的pH值，再灭菌，C错误；
D、高压蒸汽灭菌，只有当压力表的压力降到零时，才能打开排气阀，拧松螺栓，打开盖子，D错误。
故选B。
7.答案：A
解析：消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物，不包括芽孢和孢子；灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。①皮肤应进行消毒；②饮用水应进行消毒；③牛奶应进行消毒；④注射器应进行灭菌；⑤培养皿应进行灭菌；⑥接种环应进行灭菌；⑦培养基应进行灭菌；⑧手术刀应进行灭菌；综上所述适用于消毒处理的是①②③，故选A。
8.答案：B
解析：培养过微生物的培养基经灭菌后要及时处理，不能再用于培养微生物，A错误；涂布接种时，要待涂布器上酒精燃尽后冷却再使用，温度过高会杀死微生物，B正确；平板划线时，第一区和最后一区的划线不能相连，C错误；长期保存菌种时，可以采用甘油管藏法，放在-20℃冷冻箱中保存，D错误。
9.答案：C
解析：A、由分析可知，平板划线法和稀释涂布平板法都能获得由单个细胞繁殖而成的单菌落，A正确；
B、如果菌液本来浓度不高，则可以适当降低稀释倍数，以保证平板.上形成的菌落数在30-300个，B正确；
C、接种环每次使用前都要进行灼烧灭菌，C错误；
D、平板划线法要求要连续多次划线，且除了第一次划线外，每一-次划线的起点都是上一次划线的终点，逐步稀释成单个菌，D正确。
故选C。
10.答案：C
解析：A、为了防止杂菌污染，倒平板时，用左手的拇指和食指打开一条稍大于瓶口的缝隙，且需要在酒精灯火焰旁进行操作，不能将培养皿盖完全打开，避免微生物污染，A错误；
B、使用已灭菌的接种环在每次接种操作时都需要再次进行灼烧灭菌，以防止杂菌污染或杀死前次划线残留的菌种，B错误；
C、平板冷凝后要将平板倒置，以防皿盖上的冷凝水落入培养基，同时还能防止培养基中的水分过快蒸发，C正确；
D、涂布器应该用酒精引燃灭菌，D错误。
故选C。
11.答案：ABD
12.答案：AD
解析：A、柴油降解菌能分解柴油，柴油属于碳源，为获得柴油降解菌，需选用以柴油为唯一碳源的培养基，以达到筛选培养的目的，A正确；
B、所用培养基需进行严格灭菌，防止杂交污染，但土壤样液不能灭菌，否则会杀死土壤中的柴油降解菌，B错误；
C、用稀释涂布平板法分离、计数菌落时，使用的接种工具为涂布器，涂布器灭菌时，应将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待燃尽后冷却8-10s后，蘸取少量稀释后的菌液，均匀涂布在培养基的表面，C错误；
D、柴油降解菌能在以柴油为唯一碳源的培养基生长，可以逐步提高培养基中的柴油浓度来筛选对高浓度柴油耐受性更强的柴油降解菌，D正确。
故选AD。
13.答案：BCD
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