微生物计数的方法有哪些

测定样品中所含细菌或酵母菌等单细胞微生物的数量，可采用直接计数法或间接计数法。

1直接计数法

之所以叫直接计数法，是因为直接对微生物进行统计，不用先培养形成菌落。

1.1显微镜直接计数法利用计数板、膜过滤器、涂布平板等工具收集微生物（有时需要染色），后在显微镜下直接观查计数。1.1.1血细胞/细菌计数板计数法用计数板计数是常用的直接计数法之一。测定时，取定量稀释的单细胞培养物悬液放置在血细胞计数板或细菌计数板上，然后在显微镜下计数一定体积中的平均细胞数，最后换算出样品中的细胞数。细菌计数板与血细胞计数板的计数原理相同，两者的区别是计数室的高度不同，细菌计数板计数室的高度是0.02mm，而血细胞计数板计数室的高度是0.1mm，前者适用于细胞形态较小的微生物的计数，后者适用于酵母菌等细胞形态较大的微生物的计数，可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化。另外，在使用血细胞计数版时，不同的细胞计数采用不同的方格。酵母菌、细菌等微生物和红细胞计数，在中央大方格内选择4或5个（根据不同规格）中方格为样方来计数。白细胞应选四角大方格为样方计数。动物细胞计数选四角大方格或四角大方格和中央大方格作为样方来计数。1.1.2滤膜法当样品中微生物很低时，比如在测定水、空气中的微生物数量时，由于微生物浓度较低，可以先将待测样品通过微孔薄膜过滤浓缩，然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上（或一定面积上）的细菌数。

1.1.3稀释涂布平板法或涂片计数法

通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上，经固定染色后在显微镜下计数，这样又称涂片计数法。染色可用台盼蓝，台盼蓝能使死细胞染成蓝色，可分别计数死细胞和活细胞。1.2比浊法比浊法也是一种直接计数法，能快速地测定菌悬液中的细胞数量。由于菌悬液中的单细胞微生物的细胞浓度与光密度成正比，与透光度成反比，因此可借助分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，进而将未知细胞数的菌悬液的光密度与已知细胞数的相比，就可以换算出未知菌悬液所含的细胞数，以光密度表示菌量。实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。以上显微镜直接计数法统计的菌数包括死菌与活菌，需要染色的还可以区分死菌和活菌，也可以分别统计。2间接计数法之所以是间接计数，是因为不是通过显微镜直接数出微生物的个数，而是先通过培养让微生物形成菌落，用菌落数反映微生物数。原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此这一方法测得的仅是活菌数，所以又叫活菌计数法。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个活多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。2.1稀释涂布平板法稀释涂布平板法属于间接计数法的一种，这种方法可以用来测定土壤、水、食品等样品中的细菌、酵母菌、芽孢和孢子等的数量，但不适于测定样品中的放线菌、丝状真菌等丝状体微生物的数量。操作时，应注意避免污染，控制培养基的温度，以保证结果的准确性。实际操作中，先将样品通过梯度稀释后，选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30~300。在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。然后通过转换算出一定体积或质量的样品的总菌数。

2.2滤膜法

在测定水、空气中的微生物数量时，由于微生物浓度较低，可以先将待测样品通过微孔薄膜过滤浓缩，然后将滤膜放在适当的培养基上培养，待长出菌落后再进行计数。即是滤膜法。例如测定饮用水中大肠杆菌的数目：将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠杆菌的数目。另外，微生物计数法发展迅速，多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目。