基因工程中的质粒、抗药性和限制酶符号
最近在进行基因工程的教学内容,出现了许多专业术语,如质粒、载体等,同时在试题中经常出现许多符号,如pBR322、Ampr等,这些符号又代表什么呢?
了解了这些内容,可以规范书写,特别是对命制试题的老师来说。省教研室编写的《作业本》选修3第10页的抗生素抗性基因符号就是不规范的。
1.关于质粒的符号
质粒的命名, 以小写字母p表示质粒(plasmid)首字母,后接两个大写英文字母表示发现该质粒的实验室或作者,其后的数字表示质粒的实验编号。
例如,符号质粒载体pBR322中的“p代表质粒(plasmid)首字母;“BR”代表两位两位研究者Bolivar和Rogigerus姓氏的字首,“322”是实验编号。
2.关于抗药性的符号
质粒载体抗药性的符号规定用大写字母表示表型,用相同的3个小写字母表示基因型。
例如,四环素抗药性的表型用TcR表示,基因型用tetr表示(四环素类抗生素英文tetracyclines的前3个字母)。氨苄青霉素抗药性的表型符号用ApR表示,基因型用ampr表示(是氨苄西林即氨苄青霉素英文ampicillin的前3个字母)。
3.关于限制性核酸内切酶的符号
限制性核酸内切酶的命名,一般是以微生物属名的第一个字母和种名的前两个字母组成,第四个字母表示菌株(品系)。
例如,从Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性内切酶称为Bam H,在同一品系细菌中得到的识别不同碱基顺序的几种不同特异性的酶,可以编成不同的号,如Hind Ⅱ、Hind Ⅲ,HpaⅠ、Hpa Ⅱ,Mbo Ⅰ、Mbo Ⅱ等。
根据限制酶的结构,辅因子的需求切位与作用方式,可将限制酶分为三种类型,分别是第一型(Type I)、第二型(Type Ⅱ)及第三型(Type Ⅲ)。
第一型限制酶:
同时具有修饰及识别切割的作用,有识别DNA上特定碱基序列的能力,通常其切割位距离识别位可达数千个碱基之远。例如:EcoB、EcoK。
第二型限制酶(教材中提到的那种):
Ⅱ类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用,它们是重组DNA的基础。
只具有识别切割的作用,修饰作用由其他酶进行。所识别的位置多为短的回文序列;所剪切的碱基序列通常即为所识别的序列。是遗传工程上,实用性较高的限制酶种类。例如:EcoR I、Hind Ⅲ。
Ⅱ类酶切割位点在识别序列中,有的在对称轴处切割,产生平末端的DNA片段,例如,SmaⅠ:5'-CCC↓GGG-3';有的切割位点在对称轴一侧,产生带有单链突出末端的DNA片段称粘性末端,例如,EcoRⅠ识别六个核苷酸序列:5'- G↓AATTC-3',切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。
第三型限制酶:
与第一型限制酶类似,同时具有修饰及识别切割的作用。可识别短的不对称序列,切割位与识别序列约距24-26个碱基对。例如:Hinf Ⅲ。
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