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1.2 发酵工程的无菌技术（3）
【导学】
一、杂菌 划线稀释 单个菌落 “由点到线” 单个
| 项目 |
目的 |
| 挑取菌体前灼烧 |
避免接种环上可能存在的微生物污染菌种 |
| 每次划线前灼烧 |
杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端 |
| 划线操作结束后灼烧 |
及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者 |
二、梯度稀释 涂布平板 涂布器 充分 分离和纯化 计数 50 ℃ 单个菌落 计数 稀释涂布平板法 单个细胞 菌落 选择 高度稀释 单个 纯化培养物
3-5 无菌水 氮源 无菌水 污染 最低 3 倒置 24 30-300 稀释 体积
【导思】
1.提示 (1)接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧。(2)划线操作在酒精灯火焰旁进行。(3)接种环挑取菌体前后，要将试管口通过火焰。(4)划线时将培养皿的皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划线，划线后及时盖上皿盖。
提示 这样做可以得到较多独立分布的单个微生物增殖而成的菌落。
提示 防止水分过快挥发，防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
提示 原因可能是菌种不纯，混入其他杂菌，或在实验操作过程中被杂菌污染。
2.提示 为增加实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下至少涂布3个平板，统计结果后计算平均值。
提示 不合理 分析实验过程中可能的影响因素
提示 105的稀释度下取0.1 mL的菌液涂布的三个平板上的菌落数在30～300之间，计算其平均值为(212＋234＋287)/3≈244。进一步可以换算出1 g样品中活菌数为244×105÷0.1＝2.44×108(个)。
提示 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
 【导练】C A D C
【课后作业】1-10 DCBBA CBC AC ACD
11.(1)B (2)6.4×107 小 (形状、大小、颜色)不同 (3)B 5
12.(1)尿素 选择 (2)稀释涂布平板法 (3)检验平板灭菌是否彻底 菌落数目稳定时的记录 4.2×106
【选做题】1-2 B ABD
3.伊红美蓝 黑 液体 未经抗生素处理的圆纸片 透明圈越大说明抑菌效果越好 靠近透明圈 透明圈（抑菌圈）逐渐减小 灭菌
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