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原生质体杂交细胞筛选
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植物体细胞杂交技术的时候，介绍了该技术的过程，但是关于如何筛选出需要的杂交细胞，没做具体的介绍，那么
是如何出筛选目的杂交细胞呢？
原生质体间的融合是随机的，这与后面讲到的杂交瘤细胞是一样的。 两个不同亲本的原生质体混合后经或物理、或化学的方法进行诱导融合，实际上得到的是各种原生质体的混合物，包括
异核体（AB 型）
、
同核体（AA 和BB）
以及未发生融合的
双亲原生质体（A和B）
。
植物体细胞杂交的目的是要突破不同种属的植物远缘杂交不亲和的障碍，获得具有双亲遗传特性的新的植物类型。因此，需要通过筛选获得
异核体即杂种细胞
。筛选杂种细胞的常用方法有∶
（1）机械选择法。
利用两种原生质体的某些可见标志（如形态、颜色等差异），对融合产物进行鉴别，筛选出杂种细胞进行单独培养。对于在形态、颜色上难以区分的原生质体融合形成的异核体，
可利用不同荧光素分别标记两亲本的原生质体
，然后进行诱导融合，在荧光显微镜下选择同时带有两种荧光标记的杂种细胞。
（2）互补选择法。这种方法的原理是利用现成的或诱发产生的各种缺陷型或抗性型的突变体细胞作为融合实验的材料。由于突变体均不能在特定的选择性培养基上生长，而能在该培养基上正常生长的是互补的杂种细胞，因此可将其筛选出来。
（3）组织培养筛选法。
根据植物细胞对培养基成分和培养条件的要求与反应不同，可作为选择杂种细胞的依据。利用这种特性或人为地造成杂种细胞生长和分化能力的差异来进行杂种细胞的选择。
原生质体活动检测方法有形态观察法、二乙酸荧光素法、酚藏花红染色法、伊文斯蓝染色体法。
①形态观察法，主要观察原生质体形态及胞内环流。有活力的原生质体形态规则完整，颜色鲜艳，胞内环流明显
;
无活力原生质体胞内浑浊，无色泽且透光，胞内环流不显著。
②酚藏花红染色法，其原理是活性原生质体染色后在荧光显微镜下可观察到红色
;
而无活性原生质体无色。
③伊文斯蓝染色法。其原理就是死细胞或受损细胞可吸收伊文斯蓝，而完整活细胞不吸收或积累该物质。
④二乙酸荧光素法。该方法的原理是
FDA
自由穿越细胞膜，并积累在活细胞中，被活细胞酯酶酶解产生荧光素。在荧光显微镜下可以观察荧光产生。而荧光素无法在死细胞中积累。因此，无活力的原生质体无荧光产生。
由此可见，原生质体的活性可以通过形态观察，着色等方法进行鉴定。
【例
1
】
2020
年
1
月浙江选考
T29
）（
1
）为了获取某植物叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮，再将其置于经灭菌处理的较高渗透压的混合酶液中。酶解后，经多次离心获得原生质体。然后测定该原生质体的活性，可采用的方法有
____
（答出
2
点即可）。
发酵工程的菌种必须使用单一的优良菌种才能提高产量,而这些菌种都来自自然界中的微生物,怎样才能从众多的微生物中获得单一的优良菌种呢?
在实践中主要是根据微生物对不同环境(如pH、温度、光、氧等)、物质(如抗生素的抗性)或营养的需求进行筛选,或在筛选后再经过诱变育种或基因工程及细胞工程获得优良菌种。
还有基因工程中重组DNA的两次筛选。基因工程的第二步是构建基因表达的载体，即把用同一种限制性核酸内切酶处理的目的基因与运载体混合,再加入DNA连接酶，使DNA片段相同的黏性末端能够连接起来,因为这些DNA有相同的黏性末端,所以在DNA连接酶的作用下,必然形成一个封闭式的环状DNA。这些环状DNA有的是由一个DNA片段形成的,共有两种,即目的基因环状物和运载体环状物;有的是由两个DNA片段形成的,共有三种,即目的基因一载体连接物、载体-载体连接物、目的基因一目的基因连接物。
如何从如此多的环形物中找出具有目的基因的重组质粒呢?
含重组DNA分子的受体细胞筛选
；
产生单克隆抗体的杂交瘤细胞筛选
等
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